石斛菌根化组培苗对P素吸收利用的研究

濒危石斛菌根化吸收、积累P素营养的研究结果表明可溶性和难溶性不同P源,对菌根化石斛组培苗生长的效应不同,试验处理3(KH2PO4)和处理6(FePO4)的干质量分别为0.018、0.019 g,是处理1(K2HPO4)的2.62倍和2.78倍,差异达到极显著水平.可溶性P(KH2PO4)不同浓度对菌根化石斛组培苗的综合效应,表现在苗高、径粗和干质量等主要指标上,处理3为最适宜质量浓度(0.25 g·L-1),与处理9(CK)相对比,苗高是2.64倍、径粗是2.16倍和干物质是3.87倍.对苗木N、C、P营养元素的吸收、积累分析,处理3是CK的1.72、1.40和11.53倍;不同有效P含量对石斛菌根真菌F9903菌株增殖生长的试验表明当培养液浓度为含纯P为1 mg×22.76%时,其菌丝体增殖效果最佳,干质量高达1.256 mg·mL-1,是接种量的114.2倍.不同P浓度对菌根化石斛组培苗干质量的影响及其对共生菌根真菌菌丝体干质量的影响两个柱型图的重叠性好,其图形近似,效果趋势一致.     

脂肪酶产生菌的筛选、诱变及产酶条件的研究

从长春市油脂厂采集的土壤样品中分离到1株脂肪酶活力较高的白地霉1522(其发酵液酶活力为35U/mL)。以此为出发菌株,经紫外线、氯化锂、盐酸羟胺、亚硝基胍等诱变筛选后,获得1株高活力脂肪酶产生菌N79(其发酵液酶活力达80U/mL)。对诱变株N79最适培养条件的研究表明,其最适培养基组成为:蛋白胨4%,山梨醇0.75%,橄榄油0.5%,MgSO4·7H2O 0.1%;产酶最适发酵条件是,培养液起始pH为6.0～6.5,发酵温度为26～30℃,通气量为每250mL三角烧瓶中盛培养液30mL,发醇时间为32～36h。在量适培养条件下,其发酵液酶活力可达到105-115U/mL。白地霉N79的发酵液经硫酸铵盐析制得脂肪酶粗制品,它在聚乙烯醇橄榄油乳化液系统中,水解橄榄油的最适pH为7.8,最适温度为42℃,在pH4-8、4℃下存放24h及pH7.5、40℃下保温15min,酶活力不变。     

铁皮石斛类原球茎空气干燥法超低温保存中的脱水蛋白分析

 用空气干燥法将铁皮石斛类原球茎脱水至不同含水量, 进行超低温保存和热稳定蛋白的SDS-PAGE 分析, 并进行脱水蛋白的Western-blot 检测。结果表明: 在本试验条件下, 含水量以g/ g DM表示时,铁皮石斛类原球茎脱水时间(x) 对含水量(y) 的回归方程式为y = - 0.1208 x + 9.9636。含水量下降为0.1～0.5 g/ g DM时, 冻后存活率达到最大值。当含水量达1.0 g/ g DM时, 热稳定蛋白的含量明显增加, 经免疫检测其中分子量分别为28.7 和34.3 kD 的两个热稳定蛋白为脱水蛋白。认为含水量是铁皮石斛超低温保存成功的关键因素, 也是引起脱水蛋白大量积累的重要条件。     

铁皮石斛种子、原球茎和类原球茎体的超低温保存研究

对珍稀濒危植物铁皮石斛的种子、原球茎和类原球茎体进行了液氮超低温保存研究。把４个月龄的种子脱水至含水量为１２％～１９％,能获得较高的冻后存活率（９５％）和较快的恢复生长速率。种子在０．５ｍｏｌ／Ｌ脱落酸培养基上萌发３周所形成的原球茎,用玻璃化保护剂ＰＶＳ２处理１５ｍｉｎ,其冻后存活率可达８８％。将生长旺盛的暗培养类原球茎体的含水量在６～７ｄ内干燥至３０％±２％,其冻后存活率可达４８％～８０％。     

铁皮石斛种子无菌萌发

[目的]研究铁皮石斛种子的无菌萌发方法。[方法]以改良MS+土豆熟汁液2.0%+蔗糖2.0%+琼脂0.65%+0.1 mg/L NAA为种子萌发培养基,将铁皮石斛种子播种后统计萌发率。[结果]铁皮石斛种子萌发率达90%以上,继代培养后组培苗生长正常。[结论]该研究建立了铁皮石斛种子的无菌萌发体系,为铁皮石斛实生苗的大批量生产奠定了基础。     

铁皮石斛兰种子萌发及其原球茎的快繁培养条件研究

[目的]对铁皮石斛兰种子萌发及其原球茎的快繁培养条件进行研究。[方法]以铁皮石斛种子为材料,研究基本培养基、外源激素的种类和浓度及光照对铁皮石斛兰种子非共生萌发及后续分化的影响。[结果]铁皮石斛种子在光照条件下1／2MS培养基中萌发率最高,达91．63％,且萌发时间最短;在1／2MS＋0．2mr／LNAA＋0．5mg／L6-BA培养基中,原球茎的分化效果最好。[结论]该研究为实现今后铁皮石斛的工厂化生产奠定了一定基础。     

铁皮石斛组织培养研究进展

在介绍铁皮石斛的自然生长条件和繁殖状况的基础上,从种子的无菌萌发、器官发生诱导、原球茎发生与分化成苗、细胞培养、试管开花等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养的研究概况,并初步分析存在的问题及发展方向。     

铁皮石斛根系促生内生真菌的筛选

[目的]开展铁皮石斛根系促生内生真菌的筛选,为铁皮石斛的批量化生产提供生物防治基础。[方法]采用组织分离法对铁皮石斛根系内生真菌进行分离纯化,再通过单一回接试验将已分离内生真菌回接到铁皮石斛组培苗中,40 d后观察铁皮石斛根系生长情况,60 d后统计成活率。通过铁皮石斛根系生长指标,筛选出对根系促生作用最显著的内生真菌。[结果]从铁皮石斛根系中共分离得到21株内生真菌,筛选出8株优势促生根系内生真菌,其中回接菌株F5的铁皮石斛组培苗生根率最高,达99.00%,回接菌株F14的铁皮石斛苗成活率达100.00%,为对照组的395%。[结论]该研究成功解决了铁皮石斛移栽成活率低的难题。     

铁皮石斛组织培养研究

以铁皮石斛（Dendrobium catenatum）嫩茎为试验材料,建立组织培养体系。结果表明,铁皮 石斛嫩茎用 HgCl 2 试剂消毒 5~7 min 效果最好,污染率和死亡率极低。最佳诱导培养基为 MS 6-BA1.5 mg/L NAA0.5 mg/L KT0.2 mg/L 3% 蔗糖,诱导率达到 96%。最佳继代培养基是 MS 6-BA1.5 mg/ L NAA0.5 mg/L KT0.2 mg/L 5% 香蕉提取液 5% 水解酪蛋白 3% 蔗糖,增值系数达到 8.0。最适宜铁 皮石斛组培苗生根的培养基为 1/2MS 6-BA0.1 mg/L IBA1.0 mg/L 5% 香蕉提取液 2% 蔗糖,生根率为 97%。移栽 30 d 后,成活率达到 90% 以上。     

铁皮石斛原球茎多糖提取最佳工艺研究

对铁皮石斛悬浮培养原球茎多糖的提取、纯化条件进行优化研究,正交试验结果表明,提取的最佳工艺为80℃热水中浸提2 h,加水量20倍,提取3次,醇析时乙醇的浓度为80%。粗多糖脱蛋白时,氯仿/正丁醇(v/v)为1∶0.4,样品/氯仿 正丁醇(v/v)为1∶0.35,萃取时间采用5 min最佳。